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 血細(xì)胞分析儀是醫(yī)院臨床檢驗(yàn)應(yīng)用非常廣泛的儀器之一，是指對(duì)一定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器。20世紀(jì)9o年代以來(lái)，隨著電子技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)、激光技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)技術(shù)和新熒光化學(xué)物質(zhì)等各種在血細(xì)胞分析儀中的應(yīng)用.使血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理不斷完善、測(cè)量參數(shù)不斷增加、檢測(cè)水平不斷提高.尤其在白細(xì)胞五分類(lèi)技術(shù)方面，已發(fā)展到利用多項(xiàng)技術(shù)（如射頻、細(xì)胞化學(xué)染色、流式細(xì)胞術(shù)和熒光染色技術(shù)等）聯(lián)合同時(shí)檢測(cè)一個(gè)白細(xì)胞.再用先進(jìn)的計(jì)算機(jī)技術(shù)區(qū)分、辨別經(jīng)上述方法處理后的各自細(xì)胞間的細(xì)胞差別.綜合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，得出較為準(zhǔn)確的白細(xì)胞分類(lèi)結(jié)果。為臨床疾病的診斷、治療提供了重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。近年來(lái)?？梢詫?duì)白細(xì)胞進(jìn)行五分類(lèi)計(jì)數(shù)的血細(xì)胞分析儀已經(jīng)普遍使用。本文就目前血細(xì)胞五分類(lèi)測(cè)定中常用技術(shù)及其應(yīng)用進(jìn)展作一綜述。

1 血細(xì)胞五分類(lèi)技術(shù)的原理
1.1 流式細(xì)胞術(shù)
流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）是一種綜合應(yīng)用光學(xué)、機(jī)械學(xué)、流體力學(xué)、電子計(jì)算機(jī)、細(xì)胞生物學(xué)、分子免疫學(xué)等學(xué)科技術(shù)，使被測(cè)溶液流經(jīng)測(cè)量區(qū)域，并逐一檢測(cè)其中每一個(gè)細(xì)胞的物理和化學(xué)特性，從而對(duì)高速流動(dòng)的細(xì)胞或亞細(xì)胞進(jìn)行快速定量測(cè)定和分析的方法。

首先，待測(cè)細(xì)胞經(jīng)處理或染色后被壓人流動(dòng)室，與此同時(shí)，不含細(xì)胞的緩沖液在高壓下從鞘液管?chē)姵?，鞘液管人口方向與待測(cè)樣品流成一定角度，這樣鞘液就能被包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形的流束，待測(cè)細(xì)胞在包繞下單行排列，依次通過(guò)檢測(cè)區(qū)域.在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩個(gè)光源信號(hào)分別反映了細(xì)胞體積的大小和內(nèi)部的信息.經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，再通過(guò)模，數(shù)轉(zhuǎn)換器.將連續(xù)的電信號(hào)轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào)，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理，可將分析結(jié)果顯示在屏幕上。

為了保證細(xì)胞單個(gè)排列地逐一通過(guò)檢測(cè)區(qū)域，鞘流技術(shù)在流式細(xì)胞術(shù)中被廣泛應(yīng)用。根據(jù)層流理論，由于兩種液體的流速和壓力不同。在一定條件下樣品溶液與包裹它的鞘液在流動(dòng)中可以保持相互分離并且同軸。同時(shí)鞘液流可以加速樣品溶液中顆粒的流動(dòng)并迫使他們的流動(dòng)軌跡保持在液流的中軸線上，使細(xì)胞單排列地逐一通過(guò)檢測(cè)區(qū)域，這便是所謂的液流聚焦原理

1_2 阻抗法
根據(jù)庫(kù)爾特原理，將不良導(dǎo)體血液按一定比例稀釋于等滲的電解液中，在小孔電極的兩側(cè)加一恒流源.在負(fù)壓作用下，使稀釋的血細(xì)胞通過(guò)小孔。當(dāng)細(xì)胞通過(guò)截面時(shí)會(huì)由于電阻增大產(chǎn)生相應(yīng)的脈沖，其脈沖的幅度與細(xì)胞的體積成正比，脈沖的頻度與細(xì)胞的數(shù)量成正比。這便是的庫(kù)爾特原理或稱(chēng)變阻脈沖原理。利用庫(kù)爾特原理可以有效地區(qū)分淋巴及單核細(xì)胞。

1.3 激光散射法／多角度偏振光散射技術(shù)
根據(jù)光散射理論，當(dāng)激光照射到流動(dòng)室內(nèi)流過(guò)的每一個(gè)細(xì)胞時(shí)，由于細(xì)胞的物理特性，部分光線從細(xì)胞上經(jīng)不同的角度散射。其中，前向小角度散射光的光強(qiáng)可以反應(yīng)細(xì)胞體積；大角度散射光的光強(qiáng)可以反應(yīng)細(xì)胞核，漿復(fù)雜度和細(xì)胞顆粒的信息；而側(cè)向散射光的光強(qiáng)可以反應(yīng)細(xì)胞膜、核膜、細(xì)胞質(zhì)的變化。因此，可以依據(jù)細(xì)胞表明光散射的特點(diǎn)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。用激光光源產(chǎn)生的單色光束直接進(jìn)入計(jì)數(shù)池的敏感區(qū)，在不同角度（10度～7O度）對(duì)每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行掃描分析，測(cè)定其散射光強(qiáng)度，從而提供細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)的光散射信息。由于粗顆粒細(xì)胞的散射強(qiáng)度比細(xì)顆粒細(xì)胞更強(qiáng)，故光散射對(duì)細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和顆粒質(zhì)量具有很好的區(qū)別能力。